La microscòpia de fluorescència ha revolucionat la nostra capacitat per visualitzar i estudiar mostres biològiques, permetent-nos endinsar-nos en l'intricat món de les cèl·lules i les molècules. Un component clau de la microscòpia de fluorescència és la font de llum utilitzada per excitar les molècules fluorescents dins de la mostra. Al llarg dels anys, s'han emprat diverses fonts de llum, cadascuna amb les seves característiques i avantatges únics.
1. Làmpada de mercuri
La làmpada de mercuri d'alta pressió, que oscil·la entre 50 i 200 watts, està construïda amb vidre de quars i té forma esfèrica. Conté una certa quantitat de mercuri al seu interior. Quan funciona, es produeix una descàrrega entre dos elèctrodes, fent que el mercuri s'evapori i la pressió interna de l'esfera augmenta ràpidament. Aquest procés sol durar entre 5 i 15 minuts.
L'emissió de la làmpada de mercuri d'alta pressió resulta de la desintegració i reducció de les molècules de mercuri durant la descàrrega de l'elèctrode, donant lloc a l'emissió de fotons de llum.
Emet una forta llum ultraviolada i blau-violada, la qual cosa la fa adequada per excitar diversos materials fluorescents, per això s'utilitza àmpliament en microscòpia de fluorescència.
2. Làmpades de xenó
Una altra font de llum blanca que s'utilitza habitualment en microscòpia de fluorescència és la làmpada de xenó. Les làmpades de xenó, com les de mercuri, proporcionen un ampli espectre de longituds d'ona des de l'ultraviolat fins a l'infraroig proper. No obstant això, es diferencien en els seus espectres d'excitació.
Les làmpades de mercuri concentren la seva emissió a les regions gairebé ultraviolada, blava i verda, cosa que garanteix la generació de senyals fluorescents brillants, però comporta una forta fototoxicitat. En conseqüència, les làmpades HBO normalment es reserven per a mostres fixes o imatges de fluorescència febles. En canvi, les fonts de làmpades de xenó tenen un perfil d'excitació més suau, permetent comparacions d'intensitat a diferents longituds d'ona. Aquesta característica és avantatjosa per a aplicacions com les mesures de concentració d'ions calci. Les làmpades de xenó també presenten una forta excitació en el rang de l'infraroig proper, especialment al voltant dels 800-1000 nm.
Les làmpades XBO tenen els següents avantatges respecte a les làmpades HBO:
① Intensitat espectral més uniforme
② Intensitat espectral més forta a les regions d'infraroig i infraroig mitjà
③ Major sortida d'energia, facilitant l'accés a l'obertura de l'objectiu.
3. LEDs
En els darrers anys, ha sorgit un nou competidor en l'àmbit de les fonts de llum per microscòpia de fluorescència: els LED. Els LED ofereixen l'avantatge d'engegar i apagar ràpidament en mil·lisegons, reduint els temps d'exposició de les mostres i allargant la vida útil de les mostres delicades. A més, la llum LED presenta una decadència ràpida i precisa, disminuint significativament la fototoxicitat durant els experiments amb cèl·lules vives a llarg termini.
En comparació amb les fonts de llum blanca, els LED solen emetre dins d'un espectre d'excitació més estret. Tanmateix, hi ha disponibles diverses bandes de LED, que permeten aplicacions de fluorescència multicolor versàtils, fent que els LED siguin una opció cada cop més popular en les configuracions modernes de microscòpia de fluorescència.
4. Font de llum làser
Les fonts de llum làser són altament monocromàtiques i direccionals, la qual cosa les fa ideals per a la microscòpia d'alta resolució, incloses tècniques de superresolució com STED (Stimulated Emission Depletion) i PALM (Photoactivated Localization Microscopy). La llum làser es selecciona normalment per coincidir amb la longitud d'ona d'excitació específica necessària per al fluoròfor objectiu, proporcionant una alta selectivitat i precisió en l'excitació de fluorescència.
L'elecció d'una font de llum per microscopi de fluorescència depèn dels requisits experimentals específics i de les característiques de la mostra. Si us plau, no dubteu a contactar amb nosaltres si necessiteu ajuda
Hora de publicació: 13-set-2023